R藻紅蛋白(RPE)和別藻藍蛋白(APC)如何選擇?

藻膽蛋白Phycobiliproteins [R-藻紅蛋白(R-PE)和別藻藍蛋白(APC)]是用生物學檢測的超靈敏熒光染料。它們比傳統的有機熒光團靈敏度高100倍以上。即使在諸如流式細胞術和免疫測定的實際應用中,藻膽蛋白綴合的抗體的靈敏度通常遠大于相應的有機熒光染料的靈敏度。 藻膽蛋白是非常亮的熒光標記,具有多個位點,可與許多生物和合成材料形成穩定的結合。與化學合成熒光染料相比,藻膽蛋白由于其相對高的熒光量子產率和消光系數而發出強烈的熒光信號。因為它們的熒光不會被生物分子猝滅,所以藻膽蛋白可以在許多應用發揮很大的作用。藻膽蛋白與生物分子(例如IgG,Protein A或鏈霉親和素)綴合,已經在流式細胞術,熒光激活細胞分選(FACS),免疫熒光成像和有限程度的活性氧物種檢測中取得了巨大成功,目前市面上主要的兩種的藻膽蛋白是的R藻紅蛋白RPE)和別藻藍蛋白(APC)。

R藻紅蛋白(RPE)和別藻藍蛋白(APC)如何選擇?

 

藻紅蛋白 (PE)

藻紅蛋白 (PE) 是一種從紅藻中分離出來分子量為240kDa的藻膽蛋白。它呈現出強烈的橙黃色熒光(比熒光素亮約25倍),摩爾消光系數為1,960,000cm-1M-1熒光量子產率為0.84。在天然狀態下PE的吸收光譜有三個特征吸收峰,在565nm處有一個最大吸收峰,在496nm和545nm處有兩個二級吸收峰,在574nm處有最大發射值。這三個吸收峰提高了PE與配備藍色(488nm)、綠色(532nm)和黃色激光器(561-568nm)的成像儀器的兼容性。在使用PE之前,它必須首先與具有生物特異性的分子偶聯,例如抗體或鏈霉親和素等。PE和PE偶聯物通常用于流式細胞術、熒光芯片和ELISA。由于其快速的光漂白特性PE在免疫熒光顯微鏡中的用途有限。

 

PE的優勢

  • 長波長發射可最大限度地減少生物材料自發熒光的干擾
  • 藻膽素與蛋白質骨架的共價結合使熒光淬滅的影響最小
  • 極高的水溶性便于進行化學偶聯
  • 較大的斯托克位移,可用于多重染色分析
  • 多個位點可與合成的有機化合物(如抗體、CY染料或AF染料)穩定結合
  • 偶聯物可用于多色流式細胞術,可使用單個激發光產生多個發射信號

 

表1.PE光譜信息一覽:

指標 參數
適配激光器 488nm?|?532nm?|?561-568nm
Ex(nm) 564nm
Em(nm) 574nm
過濾器 TRITC
ε1 1,960,000(cm-1M-1)
Φ2 0.84

ε=最大吸收波長處的摩爾消光系數。

Φ=水性緩沖液(pH7.2)中的熒光量子產率。

 

PE光譜信息

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PE相關產品

我們提供多類的PE產品,包括CD抗體、二抗、鏈霉親和素偶聯物、標記試劑盒、PE串聯染料等。為了快速的用PE標記抗體和其他蛋白質,請使用不含硫酸銨緩沖液的凍干PE。硫酸銨的去除消除了繁瑣的蛋白質純化過程(例如透析),從而實現快速簡便的標記偶聯。我們還提供PE串聯染料,用于使用單一激發光源的多色流式細胞術。

  • 用于白細胞群和亞群免疫表型分析的CD抗體偶聯物
  • 二抗偶聯物
  • 鏈霉親和素偶聯物
  • 用于蛋白質標記的PE和串聯染料
  • PE和串聯染料抗體標記試劑盒

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相關產品推薦:

貨號 名稱 規格
B-CHM303 PE [R-Phycoerythrin] 10mg
B-CHM305 Preactivated PE [R-Phycoerythrin] 1mg
B-CHM318 R-PE Streptavidin (0.5 mg/mL) 1ml

 

別藻藍蛋白(APC)

別藻藍蛋白(APC)是一種105kDa的藻膽蛋白,存在于藍細菌和藍藻中。它呈現出明亮的紅色熒光,摩爾消光系數為700,000cm-1M-1熒光量子產率為0.68,與具有較大消光系數和量子產率的PE相比,APC沒有那么明亮。天然狀態下APC的熒光光譜以兩個吸收峰為特征,一個在651nm處的主要吸收峰和一個在625nm處的次要吸收峰,以及在660nm處的單個發射最大峰。這種雙重吸收最大值提高了與配備紅色激光(633-647nm)成像儀器的兼容性。與PE一樣,APC在使用前必須先與具有生物特異性的分子偶聯,例如抗體和鏈霉親和素等。APC偶聯物經常用于流式細胞術、熒光芯片和ELISA,由于其快速的光漂白特性,在免疫熒光顯微鏡中的用途有限。

 

APC的優勢

  • 長波長發射可最大限度地減少生物材料自發熒光的干擾
  • 藻膽素與蛋白質骨架的共價結合使熒光猝滅的影響最小
  • 極高的水溶性便于進行化學偶聯
  • 較大的斯托克位移,可用于多重染色分析
  • 多個位點可與合成的有機化合物(如抗體、CY染料或AF染料)穩定結合
  • 偶聯物可用于多色流式細胞術,可使用單個激發光產生多個發射信號

 

表2.APC光譜信息一覽:

指標 參數
適配激光器 633-647nm
Ex(nm) 651nm
Em(nm) 660nm
過濾器 Cy5
ε1 700,000(cm-1M-1)
Φ2 0.68

ε=最大吸收波長處的摩爾消光系數。

Φ=水性緩沖液(pH7.2)中的熒光量子產率。

 

APC光譜

 

APC相關產品

我們提供多類的APC產品,包括CD抗體、二抗、鏈霉親和素偶聯物、標記試劑盒、APC串聯染料等。為了快速的用APC標記抗體和其他蛋白質,請使用不含硫酸銨緩沖液的凍干APC。硫酸銨的去除消除了繁瑣的蛋白質純化過程(例如透析),從而實現快速簡便的標記偶聯。我們還提供APC串聯染料,用于使用單一激發光源的多色流式細胞術。

  • 用于白細胞群和亞群免疫表型分析的CD抗體偶聯物
  • 二抗偶聯物
  • 鏈霉親和素偶聯物
  • 用于蛋白質標記的APC和串聯染料
  • APC和串聯染料抗體標記試劑盒

 

相關產品推薦:

貨號 名稱 規格
B-CHM301 APC [Allophycocyanin] 1mg
B-CHM306 Preactivated APC [Allophycocyanin] 1mg
B-CHM302 APC-Streptavidin 10mg

 

PE和APC串聯染料

PE和APC串聯染料是由兩個不同的熒光團共價連接組成,一個供體(例如R-PE或APC)和一個發射更長波長的熒光受體(例如Cy5?、Cy7?或iFluor™647)。在這種構象中,一個熒光團(稱為“供體”)的激發導致能量轉移到另一個熒光團(稱為“受體”)并發出熒光。這種從供體到受體的能量轉移是通過福斯特共振能量轉移或FRET發生的。在流式細胞術中,串聯染料非常適合用于細胞的多色參數分析,因為它們只需要單個激發光源和有著更大的斯托克斯位移。如圖:FITC、PE、PE-Cy5?和PE-Cy7?無需熒光補償即可對細胞進行四色分析。四種熒光團都被488nm氬離子激光有效地同時激發。

 

FITC(綠色)、PE(黃色)、PE-Cy5?(橙色)和PE-Cy7?(紅色)的吸收和發射光譜顯示出清晰的光譜分離,可以對細胞進行四色分析。四種熒光團都被488nm氬激光線(藍色)有效激發。FITC可以使用FITC過濾器進行可視化。PE可以使用Cy3過濾器進行可視化。PE-Cy5?和PE-Cy7?可以分別使用Cy5和Cy7過濾器進行可視化。

 

串聯染料使用注意事項:

  • 避免長時間暴露在光照下,串聯染料對光非常敏感,應始終避光。
  • 不要冷凍串聯偶聯物,這會導致供體變性
  • 注意,固定和破膜的操作會降低串聯染料的亮度
  • 在用于多色流式細胞術時請使用適當的對照,例如用于背景、未染色細胞的同種型對照和用于補償的單色對照
  • 由于這是兩個或多個具有重疊發射光譜的串聯染料,請在分析數據之前確定是否需要熒光補償

 

相關產品推薦:

貨號 名稱 規格
B-CHM311 RPE-Cy7 Tandem 1mg
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B-CHM312 Preactivated RPE-Cy5 10mg
B-CHM313 Preactivated PerCP-Cy5.5 10mg
B-CHM314 Preactivated RPE-Cy5.5 1mg
B-CHM315 Preactivated RPE-Cy7 1mg
B-CHM316 Preactivated APC-AF700 1mg
B-CHM317 Preactivated APC-AF750 1mg

 

Biogradetech生命科學和醫藥研發行業關鍵原料與試劑的領先供應商:Biogradetech成立于2015年,總部位于美國加利福尼亞州,早期以產品技術研發服務起家,逐步發展了廣泛的產品線,并將其商業化銷售,包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域。

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